提供北京專業優質大小鼠腦室海馬腦立體定位注射AAV慢病毒腺病毒腦立體定位注射實驗外包委托技術服務：

腦立體定位注射儀是神經解剖、神經生理、神經藥理和神經外科等領域內的重要研究設備，利用顱骨表面的標志（如前囟點）為基本參考點，通過三維移動來確定動物大腦皮層下某神經結構（核團）的位置，進而完成對神經結構進行定向的腦立體定位注射、刺激、破壞、引導定位等操作，可用于帕金森氏病動物模型建立、癲癇動物模型建立、腦內腫瘤模型建立、學習記憶、腦內神經干細胞移植、腦缺血等研究。

小鼠側腦室腦立體定位注射給藥的，用的是人的Aβ1-4２，深度為顱骨表面向下2.５ｍｍ，下面資料上是２mm.處，一般都用的是人的Aβ，用２５－３５Aβ的便宜用大鼠的Aβ好像沒聽說過．

Aβ致癡呆模型
一、Aβ海馬腦立體定位注射致腦內神經炎性反應模型的制備
（1）腦立體定位注射實驗材料
動物：SD大鼠，200~250g；NIH小鼠，18~20g
試劑：Aβ1-40/Aβ25-35為美國Sigma公司產品，麻醉藥
儀器：腦立體定位儀
（2）腦立體定位注射實驗步驟
Aβ1-40/Aβ25-35肽段大鼠海馬內注射：SD大鼠1%戊巴比妥鈉麻醉，固定于腦立體定位儀上，頭頂部去毛，消毒皮膚，頭頂部正中切口，暴露前囟，按大鼠腦立位圖譜，于前囟后3.0mm，中線右側2.0mm處，微量注射器自腦表面垂直進針2.8mm，向雙側海馬緩慢注入5μl（2μg/ul,用無菌生理鹽水溶解Aβ肽段完之后分裝，-20度保存，用的時候取出一管37度孵育7天），每側注射時間5min, 留針2min，緩慢退針。所有操作均在無菌條件下進行，皮膚切開處用青霉素抗菌，縫合傷口。假手術組注射等量生理鹽水。
Aβ1-40/Aβ25-35肽段小鼠海馬內注射：立體定向儀固定小鼠（bromega 2.3mm, L:1.8mm, V:2.0mm），根據所需注射部位，按小鼠腦立體定向定位，在鉆孔后注射5ul，速度0.2ul/15秒，注射完畢后留針2min，然后每分鐘退針1mm。整個注射過程不到10min，注射效果好，小鼠很快從麻醉（氣體）中恢復。
（3）腦立體定位注射注意事項：
1、海馬與記憶功能有關，AD患者住住以記憶障礙為首發癥狀，這與疾病早期海馬的損害有關，將Aβ肽段注射入海馬區，可模擬AD發病過程。推薦使用Aβ1-40，但Aβ25-35也是引起細胞毒炎性反應的重要肽段，且價格便宜，溶解性好。
2、固定頭顱時一定要準確插入雙耳固定棒，不能太緊，也不能靠頸部，這樣容易刺激迷走神經而引起呼吸停止，難以搶救，
3、鉆孔時一定要控制好，寧慢勿快，很容易在顱骨鉆通后一不小心鉆頭進入腦組織。
4、麻醉很關鍵。腹腔注射藥物劑量不好掌握，藥物用多了小鼠死亡率很高，鼠在手術過程中稍有掙扎，就會對定位有影響，且對操作不利。

二、Aβ腦室內注射致癡呆模型的制備
（1）腦立體定位注射實驗材料
動物：SD大鼠，200~250g；NIH小鼠，18~20g.
試劑：Aβ1-40/Aβ25-35為美國Sigma公司產品
儀器：腦立體定位儀
（2）腦立體定位注射實驗步驟
Aβ1-40腦室注射大鼠：SD大鼠經腹腔注射10%的水合氯醛（0.4g/kg體重）麻醉后，固定于腦立體定位儀上，頭頂部去毛，消毒皮膚，頭頂部正中切口，暴露前囟，按大鼠腦立位圖譜，向實驗組大鼠第三腦室注射Aβ 5μl（2μg/ul，處理方法見前面所述），腦室立體定向坐標為：AP=-1mm,VD=4.5mm;微量注射器自腦表面垂直進針2.6mm，正常對照組為等量生量鹽水，其它處理方法見前面所述。
Aβ1-42腦室注射小鼠：用0.2ｍＬ0.4%戊巴比妥鈉麻醉小鼠,將小鼠固定在定位儀上,剪開頭頂部皮膚,酒精棉擦拭,暴露出前囟。采用右側腦室定位,自前囟向后2ｍｍ,矢狀縫旁開1.5ｍｍ處,即為側腦室的體表部位。用微量注射器在此位置穿一小孔,深度為顱骨表面向下2.5ｍｍ處,每只小鼠以2μl/ｍｉｎ恒速注射1.5μlＡβ(2μg/ul)。生理鹽水組小鼠注入1.5μＬ生理鹽水代替Ａβ。術后24ｈ開始各組分別給予藥物治療,按每天每只小鼠0.2ｍＬ藥液灌胃,生理鹽水對照組為0.2ｍＬ生理鹽水。
（3）腦立體定位注射注意事項：
1、有細胞毒的可溶性Aβ進入腦室，經側腦室彌漫致全腦，更接近Aβ引起細胞毒作用的實際過程，推薦使用小鼠注射Aβ1-40，其較大鼠造模簡單，Aβ用量少造價低。
2、給藥時間：（1）術前給藥一周，術后給藥一周（2）術后24小時

－－－－－－－－－幾點說明－－－－－－－－－－－－
1.Aβ1-40是用無菌生理鹽水還是雙蒸水溶解的關鍵是看你實驗的對照組海馬或者其他部位注射的是無菌生理鹽水還是雙蒸水，如對照組用無菌生理鹽水，那就用無菌生理鹽水溶解，因為只有這樣才有對照的意義。溶解的濃度要看你買回試劑的時候配置來調節。一般的制作AD模型時，每側海馬注射10ug，我的Ａβ25～3 5（購于Sigma公司）用無菌生理鹽水配制成2uｇ/uＬ,37℃下孵育一周,使其變為凝聚態Ａβ25～35。，每側海馬注射5ul。

2.Aβ1-40的注射部位，用的是海馬或者側腦室都可以，都有大量的文獻報道模型制作成功，主要看你們實驗室的習慣在哪個部位。不過我個人認為，注射在海馬比較好，因為如果注射在側腦室容易與腦脊液相溶，影響制作模型的成功。注射海馬部位，Aβ停留在腦組織，易于吸收，模型易于成功。

3.注射量10ug就可以了，量多其不是浪費。再說Aβ并不便宜。不過用于細胞的模型量就不一樣了。比如pc12細胞。

4.Aβ1-40溶解后的保存問題，用無菌生理鹽水或者雙蒸水溶解完之后分裝-20度保存，用的時候取出一管37度孵育7天。孵育的目的是讓Ａβ25～3 5老化，使其變為凝聚態Ａβ25～35。因為只有凝聚態Ａβ25～35才能使AD模型制作成功。

【專業大小鼠動物實驗腦立體定位注射AAV慢病毒腺病毒實驗外包技術服務】

腦立體定位注射提供帕金森(PD)、阿爾茲海默癥(AD)、慢性疼痛等神經系統疾病研究一站式服務項目，主要包括模型構建、行為學實驗及相關藥效評價等。

玻璃體腔注射             玻璃體腔： AAV-Syn-GcaMP6s

脊髓注射可作為研究神經系統藥物等對脊髓直接作用的手段，所給藥物等可局限于脊髓不同節段，清楚地區分藥物等對不同節段的作用。

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